ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的免疫分析方法，用于检测和定量样品中的特定抗原或抗体。以下是ELISA实验的基本步骤：
准备试剂和样品
准备所有所需的试剂、标准品和样品。确保所有试剂都是新鲜的，并且在使用前已经过适当的稀释和准备。
加样
将样品加入到酶标板的孔中。通常包括加标本、加酶结合物和加底物三个步骤。加样时应将所加物加在孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出或产生气泡。
孵育
将加好样的酶标板放入37°C的恒温箱中孵育一定时间，通常为30分钟至数小时，具体时间取决于实验设计和试剂的要求。
洗涤
孵育完成后，将酶标板从恒温箱中取出，用洗涤缓冲液（通常含有吐温或Triton X-100作为去污剂）洗涤孔板，以去除未结合的成分。洗涤通常需要重复多次，以确保彻底去除杂质。
封闭
在洗涤步骤之后，用封闭液（如牛血清白蛋白或脱脂奶粉）封闭酶标板上的剩余蛋白结合位点，以防止一抗和二抗与空白位点结合。
加酶标抗体
加入酶标记的二抗（即检测抗体），该抗体特异性结合到抗原，并且通常与酶（如辣根过氧化物酶）结合。加样后再次进行洗涤，以去除未结合的酶标记抗体。
加底物
向酶标板中加入底物溶液，酶会催化底物产生有色反应物。
终止反应
当反应达到适当颜色后，加入终止液（如硫酸或盐酸），以停止酶的催化反应。
读板
使用酶标仪读取每个孔的吸光度值（光密度）。颜色的深浅反映了抗原的浓度水平。
数据分析
根据吸光度值和标准曲线计算样品中抗原的浓度。
请注意，ELISA实验的具体步骤可能因实验设计、试剂盒类型和实验目的的不同而有所调整。在实际操作中，务必遵循所使用试剂盒的说明书和指导原则。