RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术是一种基于PCR技术的cDNA末端快速克隆方法,用于扩增cDNA的5'端和3'端。该技术可以在已知部分cDNA序列的情况下,获得完整的cDNA序列。
3'RACE原理
3'RACE的原理主要包括以下几个步骤:
反转录:
利用反转录酶将mRNA反转录成cDNA。
加尾:
使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在cDNA 3'端加上Poly(C)尾。
扩增:
根据Poly(C)尾设计特定引物,合成第二条cDNA链,然后以基因特异性引物(GSP)和正义链5'端引物为引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,获得cDNA的3'端序列。
5'RACE原理
5'RACE的原理包括以下几个步骤:
反转录:
利用已知cDNA序列设计基因特异性引物,逆转录获得第一条cDNA链。
加尾:
使用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)在cDNA 5'端加上Poly(A)尾。
扩增:
根据Poly(A)尾设计特定引物,合成第二条cDNA链,然后以基因特异性引物(GSP)和正义链5'端引物为引物,对得到的cDNA链进行PCR扩增,获得cDNA的5'端序列。
总结
RACE技术通过结合反转录、加尾和PCR扩增等技术手段,能够高效地扩增出cDNA的5'端和3'端序列。这种方法在已知部分cDNA序列的情况下,可以快速获得完整的cDNA序列,是基因克隆和研究中的重要工具。