切片染色程序通常包括以下步骤:
样本取材与固定
迅速取材,避免组织细胞成分与结构改变。
选择合适的固定液(如福尔马林、酒精等),固定液需即配即用,并确保固定液充足(通常为样本体积的20-30倍)。
固定时间根据组织类型和固定液类型进行调整,固定完成后密封容器并标记。
脱水与透明
在带盖玻璃瓶中完成脱水过程,使用不同浓度的酒精逐步脱水。
脱水完成后,使用透明剂(如二甲苯、丙酮等)进行透明处理,以使支持剂(如石蜡)易于渗入。
透明过程中需盖紧瓶盖,防止水分进入,并快速更换透明剂。
透蜡与包埋
在低温下进行透蜡,确保石蜡不凝固,保持温度稳定。
透蜡完成后,将组织块包埋于石蜡中,制成蜡块。
切片与贴片
使用切片机将蜡块切成薄片,调整切片厚度。
将切好的薄片粘贴在载玻片上,进行贴片。
染色
待切片干燥后,使用适当的有机溶剂去除支持剂。
根据需要选择不同的染色剂进行染色,如常用的苏木素和伊红染色,或其他特异性染色剂。
染色时间根据细胞类型和染色剂类型进行调整。
分化与漂洗
去除多余染料,可使用分化剂(如盐酸酒精)进行分化。
用PBS漂洗多次,彻底去除残留的染料和分化剂。
复染与封片
使用复染剂(如核复染剂)复染细胞核,并进行分化、水洗和返蓝处理。
最后用封片剂(如加拿大树胶)封片,避免气泡产生。
显微镜观察
在显微镜下观察染色效果,调整显微镜参数以获得最佳观察效果。
以上步骤适用于常规的石蜡切片染色,具体操作细节可能因实验需求和组织类型而有所不同。此外,还有其他染色方法,如冰冻切片染色、非切片法等,具体步骤也有所差异。