在FlowJo软件中画门的步骤如下：
打开FlowJo并导入数据
安装FlowJo软件后，将FCS文件与软件放在同一路径下，例如放在C盘的桌面或FlowJo软件文件夹中。
打开FlowJo，直接将FCS文件拖到软件界面即可。
查看和选择细胞群
双击其中一条数据，进入细胞界面，圈出需要的细胞群。
双击圈出的细胞位置，进入下一界面。
设置门限
一般先圈选空白对照组细胞，双击选择区域即在下一界面呈现选出的细胞群。
将X轴调为相应抗体荧光，Y轴调为histogram即可出现峰图。
然后设门，将这些设置的条件全部选中，拖到界面最上方空白处，即可将这些条件应用于全部结果中。
选择合适的门限工具
根据样本分群的情况选择合适的门限工具，如十字门、矩形门、椭圆门或多边形门。
例如，当样本分群非常方正，单阳就是单阳，双阳就是双阳时，可以选择十字门进行圈门。
合并细胞亚群
如果需要进一步分析特定细胞亚群，如对中性粒细胞进行分析，可以先把Ly6G+的细胞圈出来，然后右键选中Ly6G+细胞，选择“Equivalent Nodes”，合并这些样本。
合并后的样本将被导出为新的FCS文件，以便进行后续分析。
运行分析
选中新的合并后的FCS文件，出现下图后，再右键选择“Create Gate on Peaks”，各个组的编号会被识别出来。
运行FlowSOM、tSNE或UMAP等分析步骤，以获得更详细的细胞群体信息。
通过以上步骤，你可以在FlowJo中成功画门并进行流式细胞术数据分析。