色谱洗柱的程序可以根据不同的色谱柱类型和使用情况有所不同,但一般包括以下步骤:
正常清洗
使用与色谱柱最后一次使用相同比例的流动相进行清洗,例如,如果最后一次使用的是含盐缓冲液,则可以使用水进行冲洗。
对于反相色谱柱,通常先用大量水冲洗以去除水溶性污染物,然后用甲醇进行深度冲洗以去除残留的有机杂质。
对于正相色谱柱,可以使用非极性溶剂如正己烷或石油醚进行冲洗。
特殊清洗
深度清洗:针对顽固杂质,可以使用含有酸或碱的甲醇或乙腈溶液进行清洗。例如,对于酸性杂质,可以使用含有0.1%甲酸的甲醇溶液;对于碱性杂质,可以使用含有0.1%氨水的甲醇溶液。
反冲:如果色谱柱出现峰形变差或背压增加,可以尝试反向冲洗。在反向冲洗之前,需要确保流动相与清洗溶剂混溶,并且流速不超过色谱柱推荐流速的一半。
保存
清洗完毕后,色谱柱应保存在合适的溶剂中,如高比例的有机相(如80%甲醇或乙腈),以防止柱子受到损害或污染。
注意事项
在进行任何清洗之前,建议先阅读色谱柱的使用说明书,以确保选择正确的清洗方法和溶剂。
清洗过程中应密切关注流速和时间,避免对色谱柱造成损害。
如果色谱柱长时间不使用,建议定期进行清洗和保存,以保持其分离性能。
以上是色谱洗柱的一般程序,具体操作时可能需要根据色谱柱的类型、污染程度和实验需求进行调整。