HEPES缓冲液是一种常用的生物实验缓冲液,用于维持溶液的pH值在特定范围内。以下是几种常见的HEPES缓冲液的配制方法:
1 M Hepes, pH=7.0 Stock solution的配制
材料:HEPES 2.383g,新鲜三蒸水1L,过滤装置
步骤:
1. 将2.383g HEPES溶解在1L新鲜三蒸水中。
2. 使用0.5~1M的NaOH水溶液调节至所需pH(HEPES的有效pH范围是6.8~8.2)。
3. 过滤除菌后,分装并4℃保存。
加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)
材料:HEPES 6.5g,NaCl 8.0g,Na2HPO4·7H2O 0.198g,0.5M NaOH水溶液,蒸馏水
步骤:
1. 将6.5g HEPES、8.0g NaCl、0.198g Na2HPO4·7H2O溶解在适量的蒸馏水中。
2. 使用0.5M NaOH水溶液调节pH值。
3. 定容至500ml后保存。
2×Hepes缓冲盐溶液的配制
材料:NaCl 1.6g,KCl 0.074g,Na2HPO4·2H2O 0.027g,葡聚糖或右旋糖酐0.2g,HEPES 1g,0.5M NaOH水溶液,蒸馏水
步骤:
1. 将上述成分溶解在90ml蒸馏水中。
2. 使用0.5M NaOH水溶液调节pH值。
3. 定容至100ml后保存。
细胞培养中常用的HEPES缓冲液配方
材料:HEPES,NaCl,KCl,MgCl2,CaCl2,无菌水
步骤:
1. 根据需要称量HEPES及其他盐类。
2. 将所有成分溶解在无菌水中,使用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。
3. 使用pH计监测溶液的pH值,并通过加入少量NaOH或HCl溶液调节pH至所需值(通常为7.2-7.4)。
4. 过滤除菌后,储存在4℃冰箱中。
建议
准确性:在配制过程中,确保所有材料和设备的准确性,以避免实验结果的偏差。
无菌操作:特别是在细胞培养中使用的缓冲液,必须确保无菌,以避免微生物污染。
pH调节:调节pH值时应缓慢加入酸碱溶液,并实时监测,以免过度调节导致缓冲液不稳定。
储存:缓冲液应储存在4℃冰箱中,并避免光照,以保持其稳定性和有效性。