荧光定量程序的设定步骤如下:
打开软件
打开电脑和实时定量PCR仪(如ABI7500)。
双击桌面上的软件图标(如Biosystems 7500系列实时定量PCR仪)。
进入主界面
在软件界面中,选择“Advanced Setup”或“Create New Experiment”进入主界面。
设置实验属性
在“Experiment Properties”界面中,输入实验名称。
确认仪器型号。
在实验类型中,选择“Quantitation-Comparative CT (△△CT)”或其他合适的实验类型。
选择试剂种类(如Taqman探针法、SYBR染料法等)。
编辑基因和样本
在“Setup”下的“Define Targets and Samples”界面中,设置基因及样品。
利用“Add New Target”添加新的基因,并编辑基因名称、Reporter和Quencher。
添加新的样本,并编辑样品名称。
样品板排布
在“Assign Targets and Samples”界面中,进行样品板的排布。
利用鼠标单击或拖拽选择反应孔,并勾选左侧的基因及样本。
在Task选项中指定反应孔类型(如U代表未知样本,N代表阴性对照,P代表阳性对照)。
设置运行程序
在“Method”界面中,设置实验的运行程序。
可选地设置多梯度反应温度(如QuantStudio 3可设置3个梯度反应温度,QuantStudio 5可设置6个梯度反应温度)。
其他设置
根据需要,设置热盖温度(通常为105℃)。
设置试管加液量(通常为25μl)。
添加程序名称和各程序段循环数。
样本信息录入
打开样本参数设置界面,录入样本信息。
在当前程序染料设置里,选择试剂所对应的染料。
保存和运行
保存检测程序文件。
选择运行模式(如Standard或Fast)并开始实验。
这些步骤涵盖了从软件启动到实验设置和运行的全过程,确保荧光定量PCR实验的准确性和可重复性。建议初次操作时仔细遵循每个步骤,并在实验过程中随时检查以确保一切正常。