HE染色是一种常用的组织学染色方法,用于染色细胞核和细胞质,以便在显微镜下观察。以下是HE染色的基本步骤:
脱蜡:
首先将石蜡切片脱蜡至水。通常使用二甲苯进行脱蜡,具体步骤如下:
二甲苯Ⅰ 10分钟
二甲苯Ⅱ 10分钟
无水乙醇Ⅰ 5分钟
无水乙醇Ⅱ 5分钟
95%酒精 5分钟
90%酒精 5分钟
80%酒精 5分钟
70%酒精 5分钟
蒸馏水 5分钟
苏木精染色:
将切片放入苏木精染液中染色,通常需要3-8分钟。染色后,用自来水冲洗,然后用1%的盐酸酒精分化数秒,再用水冲洗,最后用0.6%的氨水返蓝,流水冲洗。
伊红染色:
将切片放入伊红染液中染色,通常需要1-3分钟。染色后,用蒸馏水冲洗。
脱水:
将切片依次放入不同浓度的酒精中脱水,具体步骤如下:
95%酒精Ⅰ 5分钟
95%酒精Ⅱ 5分钟
无水乙醇Ⅰ 5分钟
无水乙醇Ⅱ 5分钟
二甲苯Ⅰ 5分钟
二甲苯Ⅱ 5分钟
透明:
使用二甲苯使切片透明,具体步骤如下:
二甲苯Ⅰ 5分钟
二甲苯Ⅱ 5分钟
封片:
将已透明的切片滴上中性树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本即可使用。
显微镜观察:
使用显微镜观察染色后的切片,细胞核被染成蓝色,细胞质和胶原纤维等被染成粉红色。
注意事项
染色过程中要调节pH值,以确保染色效果。
分色步骤是关键,应在显微镜下控制进行,避免过分延长分色时间导致染色太浅。
切片脱水透明后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖,否则封片后可能呈白色雾状,影响观察。
封片时使用的树脂浓度要适当,且不能有气泡。
通过以上步骤,可以获得清晰、高质量的HE染色切片,便于在显微镜下进行组织学观察。