数字PCR（Digital PCR）是一种基于单个分子扩增和检测的技术，用于对DNA或cDNA样品进行绝对定量。其基本原理包括以下几个步骤：
样本分割
将DNA或cDNA样品分割成数千到数百万个独立的微反应单元。这些单元可以是微滴或微孔，每个单元中包含一个或多个拷贝的目标DNA模板。
独立扩增
每个微反应单元独立进行PCR扩增。在扩增过程中，使用特定的引物和DNA聚合酶，以及可能的荧光探针，对目标DNA序列进行扩增。
荧光信号检测
在扩增结束后，检测每个微反应单元中的荧光信号。荧光探针的加入使得能够特异性地检测到扩增产物。含有目标DNA模板的单元会产生荧光信号，而空白单元则没有信号。
数据分析
通过统计有荧光信号的微反应单元数量，并利用泊松分布原理，计算出原始样品中目标DNA分子的绝对数量。
数字PCR的主要优势在于其能够对极低浓度的DNA样本进行绝对定量，避免了传统定量方法如定量PCR（qPCR）中可能存在的假阳性或假阴性结果。此外，数字PCR不需要标准品或内标，使得实验更加简便和准确。
数字PCR的类型
数字PCR主要有两种类型：
芯片式数字PCR（Chip-based Digital PCR, cdPCR）
样本分散到微阵列芯片的微孔中，每个微孔作为一个独立的PCR反应单元。通过检测每个微孔的荧光信号来确定目标DNA分子的数量。
液滴式数字PCR（Droplet Digital PCR, ddPCR）
样本分散成数万个液滴，每个液滴作为一个独立的PCR反应单元。液滴式数字PCR通常利用微流控技术实现样本的精确分散和收集。
结论
数字PCR通过将样本分割成大量独立的微反应单元，并独立进行PCR扩增和荧光信号检测，实现了对DNA分子的绝对定量。其高灵敏度和准确性使其在基因表达分析、突变检测、基因拷贝数测定等领域具有广泛应用前景。