细胞程序性降温是一种在细胞保存过程中常用的方法，旨在通过控制降温速率和使用特定的设备和程序来最大限度地减少细胞损伤，确保细胞在低温条件下的存活率。以下是细胞程序性降温的一般步骤和注意事项：
预处理
向细胞中加入适量的冻存液，以保护细胞免受冰晶形成的损伤。冻存液通常含有DMSO（二甲基亚砜）等保护剂。
离心
将细胞悬液进行离心，去除多余的培养基和上清液，使细胞浓缩。离心速度和离心时间应根据细胞类型和冻存液的类型进行调整。
分装
将处理后的细胞悬液分装到冻存管中，每个冻存管通常装1-1.5毫升。分装过程中应避免气泡产生，以免影响细胞冻存效果。
程序降温
使用程序降温盒或液氮进行梯度降温。降温速率通常为每分钟-1°C至-2°C，具体速率应根据细胞类型和冻存液的特性进行调整。在降温过程中，应避免温差过大，以免细胞损伤。
程序降温的具体步骤包括：
预降温：将冻存管和细胞悬液缓慢降温到接近冰点（0°C）的温度。
冷冻：将样品从0°C迅速降温到-80°C或更低的温度。
绝热：在转移过程中使用绝热材料（如泡沫箱）将冻存样品隔离，防止温度波动。
长期保存
程序降温完成后，将冻存管迅速转移到液氮罐中进行长期保存。在转移过程中应保持冷却，避免冻存管融化。
注意事项：
保护剂的使用：DMSO等保护剂可以降低冰点，减少细胞内冰晶的形成，保护细胞免受损伤。
降温速率：过快的降温速率会导致细胞内冰晶过大，损伤细胞结构；过慢的降温速率则会延长降温时间，增加细胞损伤的风险。
温度控制：在降温过程中，应使用精确的温度控制系统，确保温度稳定，避免温度波动。
避免温差：在转移冻存管时，应保持低温状态，避免温差过大导致细胞损伤。
复苏检测：细胞冻存后应定期复苏检测，确保细胞的存活率和活力。
通过以上步骤和注意事项，可以有效地进行细胞的程序性降温，确保细胞在低温条件下的保存效果和存活率。