设置PCR仪程序通常涉及以下步骤:
打开PCR仪并选择温度梯度模式
打开PCR仪,并选择温度梯度模式。
在PCR仪的控制面板上选择梯度降温设置选项。
输入所需的目标温度范围。例如,如果你想在50°C到70°C的范围内进行梯度PCR,那么将这个范围输入到控制面板上。
输入梯度温度的温度步长。例如,你可以选择每个梯度之间的温度变化为1°C或2°C。
选择程序时间。你可以设置程序的总时间,或选择在达到所需温度范围后停止程序。
添加反应混合物到PCR管或板。
关闭PCR仪盖,并将PCR管或板放入PCR仪中的合适位置。
开始PCR程序。
进入PCR仪软件并进行基本设置
打开PCR仪自带的软件,如ABI 7500系列的仪器通常使用仪器自带的Software。
进入主界面后选择Advanced Setup。
在主界面下选择Experiment Properties界面,输入实验名称并确认仪器型号。
在实验类型中,选择Quantitation-Comparative CT (△△CT)。
选择试剂种类。
编辑基因和样本信息
进入Setup下的Plate Setup界面,编辑基因(Target)及样本(Sample)。
利用Add New Target添加新的基因,并在Target Name中编辑基因名称,Reporter和Quencher中选择所标记的荧光基团及淬灭基团。
可以利用其他按钮将之前已添加的基因进行保存(Save Target)或删除(Delete Target)。
利用Add New Target添加新的样本,并编辑样品名称。
在Assign Targets and Samples界面中进行样品板的排布。利用鼠标单击或拖拽以选择反应孔,然后勾选左侧的基因及样本,同时在Task选项中指定该反应孔类型(U代表未知样本,N代表阴性对照,P代表阳性对照)。
开始PCR程序
确认所有设置无误后,开始PCR程序。
这些步骤提供了一个基本的框架,但具体的操作可能会根据不同的PCR仪型号和软件版本有所差异。建议参考你所使用的PCR仪的用户手册或用户指南,以确保正确设置和运行PCR程序。