使用软件分析蛋白浓度的方法有多种,以下是一些常用的工具和步骤:
Photoshop
使用“矩形选框工具”选取蛋白泳道。
按Ctrl+J重建一个新的图层,并将背景图层隐藏。
通过测量蛋白条带的灰度值来估算蛋白浓度。
Image-Pro Plus
打开蛋白灰度分析软件,并导入蛋白电泳图像。
使用“放大镜”放大目标蛋白区域。
通过“Measure”功能选择蛋白条带,并获取其IOD(Intensity of Detection)值。
计算蛋白浓度时,可以使用公式:蛋白浓度 = 目的蛋白IOD值 / (只含Western Bolt条带的总IOD值)。
Quantity One
导入蛋白电泳图像后,使用“泳道-轨迹测定法”或“等高线/手绘选取目标区域测定法”来选取蛋白条带。
通过软件内置的算法计算蛋白的灰度值,并据此估算蛋白浓度。
Image J
导入蛋白电泳图像,并使用“魔棒”工具选取目标蛋白区域。
获取选定区域的灰度值,并计算蛋白浓度。但这种方法主观性较强,且操作较为繁琐。
MaxQuant
这是一个免费的蛋白质组学软件,适用于分析大型质谱数据集。
支持标记技术以及label-free无标记定量检测。
在线工具
ProtParam:可以计算蛋白的分子量、理论等电点、氨基酸组成等,通过输入蛋白序列信息进行查询。
SignalP:预测氨基酸序列中是否存在信号肽剪切位点。
TMHMM:预测蛋白质的跨膜域位置。
建议
选择合适的工具:根据具体需求和实验条件选择合适的软件。对于常规的蛋白浓度分析,Image-Pro Plus和Quantity One是较为常用的选择,因为它们操作简便且结果可靠。
注意操作准确性:在选取蛋白条带时,尽量减小主观误差,确保测量值的准确性。
验证结果:通过多次重复测量或使用不同的软件和方法验证结果的可靠性。