爱必信的快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15分钟内精确完成DNA切割的限制性内切酶,适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。
产品组分及使用方法如下:
DNA快速酶切流程
在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系:
质粒DNA:10× Cut Buffer 2 μl,底物 DNA 2 μl (up to 1 μg),Esp3I 1 μl,Total 20 μl。
PCR产物:10× Cut Buffer 2 μl,底物 DNA 5 μl (~0.2 μg),Total 30 μl。
基因组DNA:10× Cut Buffer 3 μl,底物 DNA 10 μl (5 μg),Total 50 μl。
轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。
37℃温育15分钟(质粒),或15~30分钟(PCR产物),或30~60分钟(基因组DNA)。
80℃温育20分钟即可使酶失活,停止反应(可选)。
双酶切或多酶切
每种快速内切酶的用量为1 μl,并根据需要适当扩大反应体系。
所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。
如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,在其最适反应温度下进行酶切反应。
适用于质粒的扩大反应体系
如果总反应体系大于20 μl,应适当增加温育时间,尽量使用水浴、金属浴或沙浴。
此外,爱必信的快速内切酶具有以下特点:
5~15分钟内即可完成酶切。
共用一种酶切Buffer,大大简化酶切反应体系。
良好的酶活冗余度,轻松应对底物过量或困难模板酶切。
建议在实际应用中,根据具体的DNA样本类型和实验需求选择合适的快速内切酶,并按照上述流程进行操作,以确保酶切效果和实验的顺利进行。