基因工程的基本步骤主要包括：
目的基因的获取
从基因文库中获取，如基因组文库或cDNA文库。
利用PCR技术扩增特定DNA片段。
人工合成已知序列的基因。
基因表达载体的构建
包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等组件。
通过限制性核酸内切酶切割质粒和目的基因，然后用DNA连接酶连接形成重组DNA分子。
将目的基因导入受体细胞
对于植物细胞，常用方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。
对于动物细胞和原核细胞（如大肠杆菌），使用其他物理、化学或生物方法。
目的基因的检测与鉴定
通过标记基因鉴别含有目的基因的细胞。
筛选和培育转基因生物，检测其表达情况和性状。
以上步骤是基因工程中的关键操作，每一步都对最终结果有重要影响。