荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种在PCR扩增反应体系中加入荧光基团，通过实时检测每一个循环产物荧光信号，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
荧光定量PCR的原理主要包括以下几个步骤：
引物和探针的设计：
在PCR扩增时，除了加入一对特异性的引物外，还会加入一个特异性的荧光探针。该探针两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
PCR扩增过程：
PCR反应开始时，DNA双链在高温下变性为两条单链，然后在低温下引物结合到目标序列的两条单链上，并在适温下由聚合酶延伸合成新的DNA链。在延伸过程中，Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而产生荧光信号。
荧光信号的实时监测：
荧光定量PCR仪通过高灵敏度的荧光检测系统，实时收集并分析这些荧光信号，将其转化为数字信号。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
结果分析和定量：
通过连续不断地检测反应体系中的荧光信号变化，当信号增强到某一阈值时，记录下循环次数（Ct）。该循环参数和PCR体系中起始DNA量的对数值之间有严格的线性关系。利用阳性梯度标准品的Ct值，制成标准曲线，再根据样品的Ct值就可以准确定出起始DNA的拷贝数。
荧光定量PCR具有高灵敏度、高特异性以及准确可靠的定量分析能力，广泛应用于分子生物学研究、病原体检测、基因表达分析等领域。