紫外可见分光光度法（UV-Vis Spectrophotometry）是一种基于物质对紫外-可见光区域（通常为200-800nm）电磁波的吸收特性来进行定性、定量和结构分析的方法。该方法广泛应用于化学、生物化学和分子生物学等领域。
原理
紫外可见分光光度法的原理是当一束光照射到物质上时，物质中的分子或基团会吸收光能，发生电子能级跃迁，产生具有特征性的紫外-可见光谱。通过测量物质在不同波长处的吸光度，可以确定化合物的结构和表征其性质。
应用
定量分析：
通过测量物质在最大吸收波长处的吸光度，并利用朗伯-比尔定律（Lambert-Beer Law）计算出物质的浓度。这种方法适用于多种无机和有机污染物的测定，如硝酸盐、亚硝酸盐、氨氮、酚类、氰化物等。
定性分析：
通过测定样品的吸收光谱，并与标准物质的吸收光谱进行比较，可以鉴别样品中的成分。此外，通过测量不同波长下的吸光度比值，也可以进行物质的定性分析。
研究反应动力学：
通过监测反应过程中吸光度的变化，可以研究反应的速率和动力学过程。
仪器和设备
紫外可见分光光度法通常使用紫外可见分光光度计进行测量。该仪器包括光源（通常是氙灯或卤钨灯）、光路系统、吸收池、检测器和数据处理系统等部分。
操作步骤
配制溶液：
首先配制一系列被测物的标准溶液，并测定其吸光度，绘制出A-c工作曲线。
测量吸光度：
在相同条件下，测出被测物的吸光度Ax。
计算浓度：
根据Ax的值在工作曲线上查处cx的大小，即样品溶液的浓度。
特点
灵敏度高：
能够检测到极低浓度的物质。
精密度和准确度较高：
通过正确操作仪器和校正吸收池，可以获得准确的结果。
应用范围广：
适用于多种化合物的分析，包括有机和无机物质。
仪器操作简便，快速：
价格较低，测定方法易于推广。
注意事项
吸收池校正：
必须使用两只吸收池进行校正，确保ΔT<0.3%。
空白校正：
使用空白溶剂调零，扣除溶剂的吸光度。
单色光：
为了确保准确性，通常需要使用单色光。
通过以上步骤和注意事项，紫外可见分光光度法可以有效地应用于化学、生物化学和分子生物学等领域，为科研和工业生产提供重要的分析工具。